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7003
20X LumiGLO® Reagent and 20X Peroxide
WB & IP Reagents
Detection System Kit

20X LumiGLO® Reagent and 20X Peroxide #7003

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Western Blotting Image 1: 20X LumiGLO® Reagent and 20X Peroxide

After the primary antibody is bound to the target protein, a complex with HRP-linked secondary antibody is formed. The LumiGLO® is added and emits light during enzyme catalyzed decomposition.

To Purchase # 7003S
Product # Size Price Inventory
7003P
5 ml each
7003S
25 ml each

Small Kit Includes Quantity
LumiGLO® Reagent A (20X) 1 x 25 ml
Peroxide Reagent B (20X) 1 x 25 ml

Product Usage Information

(a) Wash membrane-bound HRP (antibody conjugate) three times, for 5 minutes in TBS/T.

(b) Prepare substrate by diluting 20X LumiGLO® and 20X Peroxide to 1X in water (e.g. for 10 ml, add 0.5 ml LumiGLO® and 0.5 ml peroxide to 9.0 ml water).

(c) Incubate substrate with membrane for 1 minute, remove excess solution (membrane remains wet), wrap in plastic and expose to X-ray film. 

Solutions and Reagents

Prepare solutions with Milli-Q® or equivalently purified water.

Wash Buffer (TBS/T): 20 mM Tris-HCl (pH 7.6),

137 mM NaCl and 0.1% Tween-20

Advantages of the Phototope® Western Detection System

-Sensitivity: Detection of sub-picogram amounts of protein is routine with good primary antisera.

-Speed: Less than 1 hour is required for the entire detection procedure. Exposure times are seconds to minutes.

-Multiple Exposures: Light is emitted at a constant rate for several minutes, so you can perform multiple exposures to optimize signal intensity. Re-exposure at a future date is achieved by simply adding more reagent.

Storage

Store at 4°C.

Method Overview

There are six basic steps in the Western blotting procedures with the Phototope®-HRP Western Blot Detection System.

  1. Polyacrylamide Gel Electrophoresis of Proteins: Separate the protein samples and molecular weight standards by polyacrylamide gel electrophoresis.
  2. Transfer: Transfer the protein to membrane by standard electroblotting.
  3. Block Membrane: Block to saturate nonspecific binding sites on the membrane.
  4. 1° Antibody: Incubate the membrane with the primary antibody.
  5. 2° Antibody: Incubate the membrane with HRP-linked anti-rabbit IgG and HRP-linked anti-biotin antibodies.
  6. Chemiluminescent Detection: Add LumiGLO® reagent and capture the emitted light on X-ray film.

Product Description

LumiGLO®* chemiluminescent substrate is a luminol-based system designed for use with our Phototope®-HRP detection assays utilizing peroxidase-labeled antibodies immobilized on membranes. In the presence of hydrogen peroxide, horseradish peroxidase (HRP) converts luminol to an excited intermediate dianion. This dianion emits light on return to its ground state. Light emission is maximal immediately after exposure of the substrate to HRP and continues for 0.5-1 hour. Light can be captured on X-ray film, typically by exposure for a few seconds. Maximum sensitivity can be obtained by longer exposure. *Avoid repeated exposure to skin (see enclosed Material Safety Data Sheet or refer to our website for further information).

Background

Chemiluminescence systems have emerged as the best all-around method for western blot detection. They eliminate the hazards associated with radioactive materials and toxic chromogenic substrates. The speed and sensitivity of these methods are unequalled by traditional alternatives, and because results are generated on film, it is possible to record and store data permanently. Blots detected with chemiluminescent methods are easily stripped for subsequent reprobing with additional antibodies. HRP-conjugated secondary antibodies are utilized in conjunction with specific chemiluminescent substrates to generate the light signal. HRP conjugates have a very high turnover rate, yielding good sensitivity with short reaction times.

使用に関する制限

法的な権限を与えられたCSTの担当者が署名した書面によって別途明示的に合意された場合を除き、 CST、その関連会社または代理店が提供する製品には以下の条件が適用されます。お客様が定める条件でここに定められた条件に含まれるものを超えるもの、 または、ここに定められた条件と異なるものは、法的な権限を与えられたCSTの担当者が別途書面にて受諾した場合を除き、拒絶され、 いかなる効力も効果も有しません。

研究専用 (For Research Use Only) またはこれに類似する表示がされた製品は、 いかなる目的についても FDA または外国もしくは国内のその他の規制機関により承認、認可または許可を受けていません。 お客様は製品を診断もしくは治療目的で使用してはならず、また、製品に表示された内容に違反する方法で使用してはなりません。 CST が販売または使用許諾する製品は、エンドユーザーであるお客様に対し、使途を研究および開発のみに限定して提供されるものです。 診断、予防もしくは治療目的で製品を使用することまたは製品を再販売 (単独であるか他の製品等の一部であるかを問いません) もしくはその他の商業的利用の目的で購入することについては、CST から別途許諾を得る必要があります。 お客様は以下の事項を遵守しなければなりません。(a) CST の製品 (単独であるか他の資材と一緒であるかを問いません) を販売、使用許諾、貸与、寄付もしくはその他の態様で第三者に譲渡したり使用させたりしてはなりません。また、商用の製品を製造するために CST の製品を使用してはなりません。(b) 複製、改変、リバースエンジニアリング、逆コンパイル、 分解または他の方法により製品の構造または技術を解明しようとしてはなりません。また、 CST の製品またはサービスと競合する製品またはサービスを開発する目的で CST の製品を使用してはなりません。(c) CST の製品の商標、商号、ロゴ、特許または著作権に関する通知または表示を除去したり改変したりしてはなりません。(d) CST の製品をCST 製品販売条件(CST’s Product Terms of Sale) および該当する書面のみに従って使用しなければなりません。(e) CST の製品に関連してお客様が使用する第三者の製品またはサービスに関する使用許諾条件、 サービス提供条件またはこれに類する合意事項を遵守しなければなりません。

For Research Use Only. Not For Use In Diagnostic Procedures.
Cell Signaling Technology is a trademark of Cell Signaling Technology, Inc.
LumiGLO is a registered trademark of Kirkegaard & Perry Laboratories.